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测序级谷氨酰蛋白内切酶
物品单位 价格 品牌
毫克 76400 Wako
  • 产地:日本
  • 货号:050-05941
  • cas:66676-43-5
  • 发布日期: 2020-03-18
  • 更新日期: 2020-12-15
产品详细说明
产地 日本
品牌 Wako
货号 050-05941
用途范围 用于生物化学
纯度 ≥ 15u/mg 蛋白质%
CAS编号 66676-43-5
规格 50ug
是否进口

货号:050-05941

测序级 谷氨酰蛋白内切酶

Endoproteinase Glu C, Sequencing grade

用于生物化学

 

CAS :66676-43-5 
EC编码:3.4.21.19
EINECS编号:200-350-6
MDL编号:MFCD01324998
GHS :警告


谷氨酰蛋白内切酶简介

使用蛋白酶裂解多肽链的条件较温和,因此氨基酸残基侧链的修饰(氧化,卤代,脱酰胺等)并不会发生,含有这些基团修饰(结合位点在碳水化合物链,脂类、磷酸酯,硫酸等)的多肽通常会以完整形式良好收率回收。在相同消解条件下,得到片段的重现性很好。蛋白质的一级结构分析使用高底物特异性的酶,因为从氨基酸组成可以大致预测片段数量及其平均大小。更重要的是,可以避免由于部分(非特异性)裂解导致分离复杂。


源自金黄色葡萄球菌V8的谷氨酰蛋白内切酶,是一种丝氨酸蛋白酶。其特异性取决于缓冲液和pH以及可能的切割位点周围的结构。在乙酸铵(pH4.0)或碳酸氢铵(pH7.8),Glu-C切割谷氨酸的羧基端肽链。在磷酸缓冲液(pH7.8)中,Glu-C会切割谷氨酸和天冬氨酸的羧基端肽链。据报道Glu-C在0.2% SDS(十二烷基硫酸纳)和4.0M尿素中有活性。


降解特异性:使用B链胰岛素(insulin Box)作为底物反应1小时后的速率:≥85 %


谷氨酰蛋白内切酶性质

外观:冻干粉末,不含盐
来源:金黄色葡萄球菌 V8 
生物活性:≥ 15u/mg 蛋白质


谷氨酰蛋白内切酶应用

  • 获取表层蛋白(S-layer proteins, 来自嗜热脂肪芽孢杆菌ATCC 12980)的蛋白水解片段,以进行亲和研究。

  • 酶切天然VSTx-3肽(voltage sensor toxin 3)以测定序列。

  • 重组纯化PimA(磷脂酰肌醇甘露糖转移酶)的部分蛋白水解。

  • 糖化血红蛋白消解,用于液相-同位素稀释质谱联用分析。


谷氨酰蛋白内切酶产品列

货号

产品

包装

级别

050-05941

Endoproteinase Glu C, Sequencing grade
测序级 谷氨酰蛋白内切酶 Glu-C

50ug

生化试剂


谷氨酰蛋白内切酶重组和蛋白酶活性:

  • 碳酸氢铵缓冲液(pH 7.8) 或乙酸铵缓冲液 (pH 4.0): 该酶切割谷氨酸的羧基端肽链。

  • 磷酸缓冲液 (pH 7.8): 该酶特异性切割谷氨酸和天冬氨酸的羧基端肽链。


特异活性:如标签所示。

25℃下使用 Z-Phe-Leu-Glu-4-nitroanilide作为底物。
纯度:单峰 (RP-HPLC)

 


样品: 20 μg谷氨酰蛋白内切酶
分离柱:Aquapore RP 300, 7 Fm 4.6H×100 mm.
溶剂A:水 (含0.1% 三氟乙酸)
溶剂B:乙腈:水=70:30 (含0.1% 三氟乙酸)
梯度:30 分钟 线性梯度 0-100% B.
流速:0.5 ml/min.
检测波长:215 nm

消解特异性:使用B链胰岛素作为底物,消解反应开始1小时后反应速率大于等于85 %

 

①Pre (1)-Glu (13), ②Ala (14)-Glu (21), ③Arg (22)-Ala (30)


消解液:100μg B链胰岛素+10μg 谷氨酰蛋白内切酶溶于100μl碳酸铵缓冲液  (25 mmol/l, pH 7.8), 1 小时; 25℃
样品:10 μl 消解液+90 μl碳酸铵缓冲液
柱子:Aquapore RP 300, 7 μm 4.6φ×100 mm

分离条件:
溶剂:乙腈:水=70:30 (含0.1% 三氟乙酸)
流速:0.5 ml/min
检测波长:215 nm

贮存条件:在2-10℃下保存。等份溶液保存在-20℃下。
包装:50μg

谷氨酰蛋白内切酶参考资料

(1) Houmard, J. and Drapeau, G. R. :Proc. Natl. Acad. Sci.USA., 69, 3506 (1972)
(2) Drapeau, G. R. :Can. J. Biochem ., 56, 534 (1978)
(3) Seetharama, R. and Seetharama, A., J. Cell. Biochem.,30, 87 (1986)


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